液相色譜在使用過程中難免會遇到各種問題，在此，我們把液相在使用過程中出現(xiàn)頻率高的問題稱為液相色譜的“公敵"--氣泡。

1、“公敵"簡介

氣泡，在液相色譜的使用過程中，被提及多的一個名詞，它會帶來一系列的問題，例如壓力波動、基線噪音等問題，它絕對是早期液相色譜工作者的眼中釘、肉中刺—“頭號公敵"。

2、“公敵"的產(chǎn)生

1、液體對于氣體是有一定的溶解度的。液體的壓力越高，對氣體的溶解度越好。所以，當(dāng)一瓶未開封靜置的可樂，你是看不到氣泡的，因為氣泡都溶解在里面了。當(dāng)你開啟瓶蓋，直接的影響就是瓶子里面的壓力降低了，對氣體的溶解度變小，所以氣體就析出變成一個個的小氣泡。

3、喝過啤酒或者碳酸飲料的人都有這樣的經(jīng)歷，當(dāng)你搖晃瓶子，然后瞬間把瓶蓋開啟，啤酒或碳酸飲料瓶中會噴出大量泡沫，搖晃的越劇烈，噴射的越猛，不難看出，溶解氣體的液體在振蕩和運動過程中，也容易讓氣泡析出。

4、上學(xué)的時候，化學(xué)課上，我們曾經(jīng)懷疑過一個問題：把一升甲醇倒進一生純水里面，它的體積是不是兩升？當(dāng)我們親自試驗后，就排除了這個疑問，而且我們可以明顯看到，當(dāng)兩種液體混合的時候，會有大量的氣泡冒出，體積也小于兩升。

綜上所述，溶解在液體中的氣體，在遇到環(huán)境壓力變低、震蕩和運動以及兩種液體混合的時候，都有利于氣泡的析出。

5、“公敵"的危害

對于液相色譜，泵是液相色譜泵的功能載體，是將流動相以穩(wěn)定的流速通過色譜柱，對想要分析的化合物進行洗脫。對于泵，穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。如果流動相在系統(tǒng)里面的混合和運動過程中，有氣泡出來，問題也就接踵而至。假設(shè)泵本來應(yīng)該輸出1ml/min的流動相，里面出現(xiàn)一點氣泡，體積就會發(fā)生變化，而且氣泡的可壓縮性很強，體積還容易忽大忽小，流速也就不準(zhǔn)確、也不再穩(wěn)定。

氣泡的存在還會對檢測器產(chǎn)生危害，檢測器位于色譜柱出口，流動相從色譜柱末端出來，會有一個壓力的驟降，如果之前液體的壓力有100bar，那么到了流通池內(nèi)，壓力也只有10bar左右。而壓力的降低會使流動相中氣體的溶解度降低，從而導(dǎo)致氣泡的產(chǎn)生，導(dǎo)致檢測器基線不穩(wěn)。

氣泡的另一個影響與流動相中所溶解的氣體有關(guān)，假如流動相里面溶解的是空氣，主要含有氮氣和氧氣。一般來說，氮氣比較穩(wěn)定，但是氧氣比較活潑，它極有可能會跟某些樣品發(fā)生反應(yīng)，造成樣品的降解。特別是當(dāng)你想要分析的樣品里面含有一些熒光基團，想要用熒光檢測器來檢測的話，流動相里溶解的氧氣會跟樣品的熒光基團反應(yīng)，造成熒光淬滅，從而導(dǎo)致檢測器無法檢測到該化合物。

綜上所述，氣泡的危害主要是造成泵的流量不準(zhǔn)、基線噪音和可能會與樣品反應(yīng)而影響檢測。

6、“公敵"的消除

早期的氦吹脫氣是當(dāng)時業(yè)界標(biāo)準(zhǔn)，但是其成本高，操作不便。后來又出現(xiàn)了抽真空脫氣和超聲脫氣，他們對很多應(yīng)用來說，算是不錯的脫氣方法，但是這些仍不能阻擋氣泡時不時就冒出來，給我們制造各種小麻煩。直到在線真空脫氣機的出現(xiàn)，才使這一麻煩迎刃而解。

在線脫氣的原理：流動相通過真空腔內(nèi)的一段半透膜的管路，半透膜上面的小的孔道可以讓氣體分子透過而液體分子無法透過，這樣流動相里面溶解的氣體分子就被外面的真空泵從管道里面吸出來，經(jīng)過脫氣的流動相繼續(xù)輸送到泵。

四、高效液相色譜儀常見故障及解決方案

液相色譜儀在使用的過程中，可能會出現(xiàn)的故障：

1、流動相脫氣不充分；

2、流動相供給不暢；

3、流動相和貯液器被污染。

五、解決方案：

1、流動相脫氣不充分，對流動相進行再脫氣，采用更有效的脫氣方法（如通氮氣保護）或兩種方法配合使用，改變系統(tǒng)內(nèi)混合為系統(tǒng)外低壓預(yù)混合。

2、流動相供給不暢，可能的原因是流動相已接近用完，管路吸入氣體引起泵壓力不穩(wěn)，應(yīng)經(jīng)常觀察貯液器中流動相的量，加足流動相的量保證所有的樣品分析完畢；輸液管路上安裝沉子沉至瓶底，貯液器蓋上留一小孔正好夾住進液管，使其不能上下移動；過濾器阻塞會引起管道和泵腔空化，也會使壓力不穩(wěn)；當(dāng)過濾器被微粒所阻塞或長霉時，去掉過濾器后系統(tǒng)會運轉(zhuǎn)正常，換上新過濾器即可；如果換上新過濾器仍然不暢，那就需要檢查流動相的制備過程，或者換大孔徑的過濾器，流動相都要重新過濾。流速過高、阻力大，造成空化現(xiàn)象，這是由于過濾器孔徑、管道內(nèi)徑、流速和溶劑黏度等引起的。出現(xiàn)這種情況時，可嘗試用下列方法解決：

1）改用低流速；

2）換大孔徑的過濾器；

3）增加進液管路內(nèi)徑；

4）抬高或加壓貯液器；

5）臨時不用入口過濾器（流動相確保做好過濾）；

其它問題，包括滲漏或接頭松動、低壓混合器過濾器阻塞、泵部件損壞（密封墊等），都能引起流動相供液不正常，注意檢查排除。

3、貯液器或流動相被污染，會出現(xiàn)一些問題：產(chǎn)生有規(guī)則的噪音增大、檢測器基線上升等現(xiàn)象。流動相中的污染物可能會被泵以穩(wěn)定的濃度打入系統(tǒng)，而后再以穩(wěn)定的濃度流出來，所以在色譜圖中不出多余的峰。

不干凈的貯液器會污染清潔的流動相，每種流動相要備有專用的貯液器，或者定期報廢貯液器，都是良好的工作習(xí)慣。流動相污染源來自這幾個方面：試劑質(zhì)量不高，玻璃器皿不合格，微生物的影響，配制流動相時操作不當(dāng)?shù)龋虼艘笥酶呒兌然瘜W(xué)試劑和HPLC級溶劑，一旦發(fā)現(xiàn)試劑有問題應(yīng)堅決報廢掉。

玻璃器皿應(yīng)按規(guī)定清洗干凈，為防止生長微生物，每天要按前述的方法清洗系統(tǒng)；懷疑系統(tǒng)內(nèi)生長了微生物時，可用稀硝酸沖洗(注意不要損壞柱和管路系統(tǒng))，在緩沖液內(nèi)加生長抑制劑（0.04%疊氮鈉）或冷藏緩沖液；每天用0.2μm的過濾器過濾緩沖液，也會有效地防止微生物污染系統(tǒng)；真空脫氣時要防止泵油帶入流動相；應(yīng)該用清潔的惰性塞子、攪捧、過濾器和玻璃器皿配制流動相；已經(jīng)污染的色譜儀流動相一定要廢棄掉。

六、總結(jié)

懂這些就能輕松解決高效液相色譜儀故障了！儀器設(shè)備的良好運行離不開平時的規(guī)范操作和正確的維護保養(yǎng)，熟悉儀器設(shè)備的基本操作，了解儀器設(shè)備的維護保養(yǎng)方法，是每一個化工實驗室研發(fā)人員必須具備的基本實驗素養(yǎng)，具備了這些基本實驗素養(yǎng)后，才能保證化工實驗室研發(fā)項目順利、安全、高效地進行。